A amostra é colocada na parte inferior da placa, através de aplicações sucessivas de uma solução da amostra com um pequeno capilar. Deve-se formar uma pequena mancha circular.
À medida que o solvente sobe pela placa, a amostra é compartilhada entre a fase líquida móvel e a fase sólida estacionária. Durante este processo, os diversos componentes da mistura são separados.
A placa é imersa em uma cuba cromatográfica, que contém uma pequena quantidade de solvente (eluente). Este eluirá pela camada do adsorvente por ação capilar. As amostras devem ser colocadas, na placa, acima da linha do eluente.

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